Sisältö

• ohjeet
• Kolonnin palauttaminen
• vihjeitä
• varoitus
• Mitä tarvitset

Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) on yleinen laboratorioanalyysimenetelmä, jossa näyte erotetaan kemiallisiksi komponenteiksi, kun se kulkee kolonnin läpi. Tämä pylväs on täytetty huokoisella materiaalilla, tyypillisesti silikageelillä. Normaali käänteisfaasipylväs, kuten C8, voi joskus tukkia tai saastua. Nämä sarakkeet voidaan hakea hyvin yksinkertaisilla tekniikoilla.

ohjeet

Oikea liuotin voi saada likaisen kolonnin (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Kolonnin palauttaminen

1. Irrota pylväs ja käännä sen asentoa niin, että liikkuva faasi menee nyt läpi sen, mikä on normaalisti sarakkeen lähtö. Kiinnitä pistorasia kolonnin toiseen päähän (joka oli alkuperäinen merkintä) ja anna sen tyhjentyä.

2. Pumppaa sarja liuottimia polaarisuuden vähenemisen järjestyksessä. Suositeltava perussarja on aloittaa metanolilla, siirtyä sitten asetonitriiliin, sitten asetonitriili / isopropanoliin (75:25), isopropanoliin, metyleenikloridiin ja heksaaniin. Jos liikkuva faasi, joka oli kolonnissa, oli imukykyinen, on suositeltavaa kulkea vedellä ennen metanolia. Virtaus 1 - 2 millilitraa minuutissa on riittävä ja noin kymmenen tilavuuspylvästä kustakin liuottimesta tulisi pumpata. Tilavuuspylväs on kolonnin sisätila, ja se lasketaan (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), jossa DI on pylvään sisähalkaisija ja L on pituus.

   
   

3. Pumppaa vielä kymmenen tilavuusosaa isopropanolia kolonnin läpi sen valmistamiseksi käytettäväksi alkuperäisen liikkuvan faasin kanssa. Jos alkuperäinen liikkuva faasi on pehmustettu, pumppaa vettä myös kolonnin läpi isopropanolin jälkeen ennen paluuta alkuperäiseen liikkuvaan faasiin.

4. Irrota pylväs, käännä se takaisin ja kytke se uudelleen niin, että se on alkuperäisessä asennossaan (niin että liikkuva vaihe tulee kolonnin oikealle puolelle). Kytke kaiuttimen lähtö uudelleen ilmaisimeen.

vihjeitä

• Jos tämä menetelmä ei puhdista kolonnia perusteellisesti, voidaan käyttää 50: 50-seos dimetyyli- sulfoksidia (DMSO) ja dimetyyliformamidia (DMF). Proteiinien ja metalli-ionien jäännökset voivat vaatia muita tyyppisiä liuottimia, kuten ionisäästäviä reagensseja tai etyleenidiamiinitetraetikkahapon (EDTA) liuosta.

varoitus

• Joissakin laitteissa selkäyksellä on karkea metalli-seula sisääntulona. Tässä tapauksessa kolonnin palauttaminen mahdollistaa kiinteän faasin poistumisen sarakkeesta, ja tätä ei suositella. Ota yhteyttä jälleenmyyjään, jos et ole varma.
• Tässä prosessissa käytetty liuotin on mahdollisesti myrkyllistä nieltynä ja hengitettynä. Käytä normaaleja varotoimenpiteitä käsitellessäsi.

Mitä tarvitset

• HPLC-laite
• vesi
• metanoli
• asetonitriili
• isopropanoli
• Metyleenikloridi
• heksaani