Sisältö
Korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) on työkalu, jota käytetään erottamaan aineet seoksesta. Tiettyjen kemikaalien erottaminen ja tunnistaminen tapahtuu pääasiassa järjestelmän kromatografiakolonnissa. CLAE: lle on saatavana monia saraketyyppejä, ja kutakin käytetään tietyntyyppiseen analyysiin. C18-pylväs on vahvin yleisesti käytetty ei-polaarinen. Pitkään jatkuvan käytön jälkeen liuottimen virtausnopeus sen läpi pienenee ja analyysiaika kasvaa. Toinen syy analyysiajan lyhenemiseen on se, että näytteillä on pieniä määriä kemiallisia aineita kolonnimateriaaliin, mikä vähentää kykyä erottaa ne. Sen pinta voidaan palauttaa käsittelemällä materiaali sarjalla spesifisiä liuottimia sen puhdistamiseksi jäljellä olevista näytteistä ja elvyttääkseen kantaja-aineen.
Vaihe 1
Poista pylväs C18 virtaussuunnasta ja aseta se vastakkaiseen suuntaan. Liuottimen saaminen takaisin läpi lievittää ajan myötä esiintyvää kerääntymisvaikutusta. On varottava, ettei kolonnin loppuun kertynyt liikaa materiaalia. Jotkut tehtaat käyttävät yläosassa suurempaa silmää, joten kun virtaus muuttuu, verkko on alla olevassa asennossa. Tätä palautusmenetelmää kutsutaan virtauksen kääntämiseksi. Jotta kertyminen ei pääse virtaamaan järjestelmän ilmaisimeen ja mahdollisesti aiheuttamaan esteitä, anna sen toimia ilman ilmaisinta kytkettynä ja ohjaa virtaus kolonnista hävitettäväksi.
Vaihe 2
Aseta liuottimen läpivientiputki sarjaan liuottimia kolonniin jääneiden yhdisteiden eluoimiseksi vastakkaiseen suuntaan. Nämä liuottimet vaihtelevat hydrofiilisten ominaisuuksiensa suhteen. Vaihtelemalla niitä eluoidaan yhdisteet, joilla on yhtä monipuolinen hydrofiilinen luonne. Käytä 50 ml kutakin seuraavista liuottimista peräkkäin: vesi (jos käytät puskuria), metanoli, isopropanoli, dikloorimetaani, heksaani, dikloorimetaani ja isopropanoli.
Vaihe 3
Vaihda kolonni oikeaan suuntaan ja anna liuottimen virrata sen läpi. Pese se vähintään 75 ml: lla ennen jatkamista. Testaa se kuviolla, jota käytit silloin, kun se oli uusi, ja tarkista tulokset. Kiinnitä huomiota, kun saavutat enimmäispitoisuuspisteet ja kokonaisanalyysiajan. Aste, jolla nämä attribuutit vastaavat alkuperäistä testiä, kun se oli vielä uusi, osoittaa, missä määrin sarake palautettiin. Jos tulokset eivät ole tyydyttäviä, vaihda pylväs uuteen ja heitä vanha pois.
