Sisältö
Kylmää alkoholia käytetään DNA: n erottamiseksi vesipohjaisista liuoksista, jolloin se voidaan puhdistaa myöhempää geneettistä testausta varten. Alkoholin lisääminen DNA: ta sisältävään liuokseen on yksinkertainen tapa tehdä se puhtaana alhaisemmissa lämpötiloissa ja hidastaa sitä hajottavia entsyymejä, jolloin saadaan parempi uutto.
Solujen katkaiseminen
Ekstraktiomenetelmillä puhtaan DNA: n saamiseksi on päästävä eroon kaikista kudoksen molekyyleistä ja kemiallisista komponenteista, joista DNA on uutettu. Ensimmäiset vaiheet sisältävät soluseinien tuhoutumisen. Tämä voidaan tehdä erilaisilla kemiallisilla aineilla, jotka ovat syövyttäviä solukalvoille, mutta eivät vahingoita DNA: ta. Solut voidaan myös sonikoida, homogenoida tai jauhaa kalvojen tuhoamiseksi.
Lipidien poistaminen
Kun soluseinät on tuhottu, lisätään pesuainetta eroon solun kalvoja muodostavista rasvoista ja öljyistä. Pesuaineet aiheuttavat öljyjen ja rasvojen liukenemisen liuokseen.
Proteiinien poistaminen
Proteiinit ja entsyymit voidaan hajottaa lisäämällä liuokseen proteaasi. Proteaasit hajottavat proteiinit pieniksi peptideiksi ja aminohappoiksi.
Saostava DNA
Jääkylmän alkoholin lisääminen liuokseen saostuu ja aggregoituu DNA: ta. Geneettinen materiaali voidaan kerätä sentrifugoimalla näyte ja dekantoimalla nestekerros. Sen tulisi olla pieni sedimentti sentrifugiputken pohjassa.
Puhdistava DNA
DNA voidaan pestä suspendoimalla uudelleen kylmää alkoholia sisältävään liuokseen ja sentrifugoida uudelleen useita kertoja hyvin puhtaan näytteen saamiseksi. Tyypillisiä alkoholeja ovat etanoli ja isopropanoli. Tämä prosessi jättää erittäin puhtaan näytteen tiukoissa testeissä.
