Sisältö

• ohjeet

Kun osallistut korkeamman tason mikrobiologiaan, opettajasi voi vaatia sinua suorittamaan projektin, jossa sinun on tunnistettava tuntematon bakteeri testien sarjan avulla. Tämän bakteerin tunnistamiseksi on välttämätöntä, että kaikki asianmukaiset laboratoriolaitteet ja erilaiset laboratoriomenetelmät ovat tiedossa. On myös edullista, että bakteereista ja niiden laboratoriokokeista saadaan vuokaavio, jotta voit tunnistaa bakteerisi.

ohjeet

Viljelylevyt mahdollistavat bakteerien eristämisen niiden ominaisuuksien helposti tunnistamiseksi (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Valmistele kaikki testit ennen kokeilun aloittamista. Tähän sisältyy agar-levyjen ja -putkien valmistus sekä tarvittavien indikaattorien, kuten Kovacin reagenssin, valmistaminen. Merkitse kaikki putket ja levyt asianmukaisesti, jotta ne eivät sekoittuisi, mikä johtaa virheellisiin tuloksiin.

2. Kylvä bakteereitasi. Tämä määrittää bakteerin muodon ja värin, kuten grampositiiviset (violetti), gram-negatiiviset (punaiset tai vaaleanpunaiset), kookospähkinät (pyöreä), spirokeet (spiraali) tai tangot. Voit kylvää bakteeni tarvitsemaan puhdasta terää, vettä, kiteytettyä violettia, jodia, valkaisuaineita, safraniinia, imukykyistä paperia, valomikroskooppia ja joitakin paperipyyhkeitä. Kun silmukka on lävistetty, aseta se pisaraan vettä terään. Käännä silmukka uudelleen ja aseta pieni määrä tuntemattomia bakteereitasi vesipisaraan. Siirrä terä liekin yli muutaman kerran kuivumaan ja kiinnittämään bakteerit täysin terään. Peitä se kiteytetyllä violetilla, jätä se minuutiksi ja pese sitten se varovasti. Peitä terä jodilla. Jätä 30 sekuntia ja pese sitten. Aseta imukykyinen paperi terän päälle ylimääräisen veden poistamiseksi. Sitten kaada valkaisu terään. Viiden sekunnin kuluttua pese valkaisuainetta. Lopuksi peitä terä safraniinilla. 40 sekunnin kuluttua pese terä ja kuivaa se varovasti paperipyyhkeellä. Aseta pisara öljyä liusan bakteerien alueelle ja katso mikroskoopin alle. Huomaa näkyvien bakteerien muoto ja väri.

   
   

3. Testaa oksidaasi bakteereissasi. Tätä varten tarvitaan paperisuodatin, oksidaasireagenssi, E. coli, Pseudomonas ja sen tuntemattomat bakteerit. Tässä testissä kontrollit ovat E. coli ja Pseudomonas. Sinun bakteerisi pitäisi olla alle 24 tuntia vanhaa tässä testissä. Kiinnitä kahva ja aseta pieni määrä kullekin bakteerille paperisuodattimeen. Käytä pisaraa yhden pisaran reagenssin oksidaasin sijoittamiseen kussakin bakteerissa. Merkitse jokaisen bakteerin väri 10 sekunnin kuluttua. E. coli antaa positiivisen tuloksen ja Pseudomonas antaa negatiivisen tuloksen. Sytokromioksidaasientsyymille positiiviset bakteerit tulevat purppuriksi, ja negatiiviset bakteerit eivät muuta väriä.

4. Vedyn sulfiditesti (SIM). Pyyhi kahvaa ja poista se bakteereista levystä. Siirrä SIM-putki bakteereihin ja peitä se. Jätä tämä putki uuniin 18 - 24 tunnin ajan 37 ° C: ssa. Tunnista, onko bakteeri mobiili (onko lippu). Jos on kasvua ja pilvistä kaukana siitä, missä bakteereita istutit, se on mobiili. Aseta sitten kaksi tippaa Kovac-reagenssia putkeen. Jos sen väri muuttuu punaiseksi tai vaaleanpunaiseksi, sen bakteeri on positiivinen tälle testille ja sisältää tryptofaania, joka on siten indolin tuottaja. Jos putki muuttuu mustaksi, sen bakteerit tuottavat rikkivetyä.

   
   

5. Suorita Simmon-sitraattitesti. Siirrä bakteerit kahteen koeputkeen Simmonin agarilla. Jätä ne uuniin 18 - 24 tuntia 37 ° C: ssa. Agar on alunperin vihreä, mutta jos bakteerit käyttävät sitraattia hiililähteenä, väri muuttuu vihreästä siniseksi. Sininen on positiivinen tulos. Jos putket pysyvät vihreinä, niiden bakteerit ovat negatiivisia, kun käytetään sitraattia yhtenä hiililähteenä.

6. Suorita metyylipunainen testi (MRVP). Tätä testiä varten tarvitaan kaksi putkea, jotka sisältävät peptonin, puskurien ja dekstroosin (tai glukoosin) liuoksen. Siirrä kukin putki tuntemattomiin bakteereihin ja palaa uuniin 18–24 tuntia 37 ° C: ssa. Kun olet valmis, lisää putkeen kolme tippaa metyylipunaa. Tämä on MR-putki. Jos putki muuttuu keltaisesta punaiseksi, sen bakteeri on positiivinen ja käyttää hapan sekoitusreittiä fermentoinnin aikana (maitohappo, etikka ja muurahaishapot syntyvät). Toisessa putkessa lisätään kolme tippaa VP-reagenssia. Jos putki muuttuu punaiseksi, bakteerit ovat positiivisia diatsetyyliä, fermentointituotetta muodostettaessa. Jos putki muuttuu ruskeaksi, bakteeri on negatiivinen.

7. Etsi bakteereitasi merkitsemällä positiiviset ja negatiiviset tulokset vuokaaviossa.